心绞痛急发作时要如何用药才正确 http://www.zgbdf.net/baidianfengjiankangzixun/baidianfengxinyao/29627.html荧光素酶（luciferase）是自然界中能够产生生物荧光的酶的总称，其中最有代表性的是从甲虫中分离得到的萤火虫荧光素酶和从海肾中分离得到的海肾荧光素酶。萤光素酶是理想的报告基因，因为哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶，一旦转录完成立刻就生成功能性的萤光素酶，同时在所有的化学发光反应中，它的光产物具有最高的量子效率，检测灵敏度高。荧光素酶报告基因被广泛用于miRNA靶基因验证。
DualLuciferase双荧光素酶报告基因检测，在细胞中能够同时检测两种不同荧光素酶的活性，萤火虫（Photinuspyralis）萤光素酶和海肾（Renillareniformis）萤光素酶。其中Photinuspyralis作为报告基因反应目的基因表达的改变，Renillareniformis作为内参基因。首先用FFL试剂测定了萤火虫荧光素酶的光信号，接下来，将RL试剂添加到同一个孔中。RL试剂终止萤火虫荧光素酶的光信号并引发海肾荧光素酶反应。这两种反应的光信号强度可以在光度计上测量。
应用：
DualLuciferase双荧光素酶报告基因检测，具有灵敏度高、动态范围广、应用灵活等优势，目前已应用到分析转录因子对启动子的调控作用、启动子结构、基因激活、基因调控、非编码RNA靶向互作等研究领域。?
特点：
在同一样品中检测萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶活性，双报告基因检测；
灵敏度高，检测范围广：能够检测到2fg荧光素酶；
兼容性强，可以使用任何光度计进行测量，实现自动化；
实验操作简单快速，三步检测法可在20分钟内检测出双荧光素酶水平；
可用于研究弱启动子，低水平表达/调控及在转染不佳的细胞中的表达。
实验结果：
光强度（Thelightintensity，RLU）与荧光素酶浓度成正比
荧光素酶滴定：在细胞裂解液中稀释并在96孔板中测定
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参考文献：
PaguioA,etal.().Improveddual-luciferasereporterassaysfornuclearreceptors.CurrChemGenomics.4:43-9.
RakauskaiteR,etal.().Arapid,inexpensiveyeast-baseddual-fluorescenceassayofprogrammed--1ribosomalframeshiftingforhigh-throughputscreening.NucleicAcidsRes.39(14):e97.
JiaS,etal.().Relativequantificationofprotein-proteininteractionsusingadualluciferasereporterpull-downassaysystem.PLoSOne.6(10):e.
达科为
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